品牌：lifeglobal 图5 global® DMSO Blastocyst 玻璃化冷冻复温套装 ·1瓶1ml解冻液1，包含蔗糖和10mg/ml的HSA，使用 global® w/HEPES缓冲液。 ·1瓶1ml解冻液2，包含蔗糖和10mg/ml的HSA，使用 global® w/HEPES缓冲液。 ·1瓶1ml解冻液3，包含10mg/ml的HSA，使用 global® w/HEPES缓冲液。 ·4个SunIVF embryo GPS® 操作皿，产品经过无菌、内毒素和MEA检测。 使用说明 1.再水合过程应该在20-27°C下进行。 2.在培养设备中孵化时尽量减少标本见光。 3.在使用 global® DMSO Blastocyst玻璃化冷冻复温套装(解冻液1, 解冻液2 and 解冻液3)之前，将其升温至20-27°C。 4.参阅玻璃化冷冻载体生产商关于所使用载体的使用说明。 5.用液氮填充液氮贮存器到足够的深度，深度必须能完全淹没装有载体的冻存管（杯），将液氮贮存器放置于包含有要解冻的玻璃化样品的液氮罐附近。 6.将载体从Cryocane和冻存管（杯）中取出并且快速转移到装有液氮的液氮贮存器中，保持载体始终浸在液氮中。 7.把液氮贮存器放置于显微镜附近，以方便快速操作。 8.在SunIVF embryo GPS® 操作皿上标记所有必要的信息。 9.使用前，把每瓶解冻液1、解冻液2、解冻液3 轻轻正反摇动几次将其摇匀。 10.在无菌条件下，转移20 μl 解冻液1到SunIVF embryo GPS®（W1a）中，见图2。 11.转移两滴20 μl 解冻液2到SunIVF embryo GPS®（W2a & W2b）中，见图2。 复温和再水合 12.用镊子找到液氮存储器内冻存管（杯）中的载体，此时只有处理一个载体。 13.小心载体从冻存管（杯）中取出，保持装有胚泡的部分在液氮液面以下。 14.遵照载体的使用说明进行复温和打开载体，然后立即转移载体中的内容物（约1μl）到embryo GPS® 操作皿中，见图2。防止转移内容物时形成泡泡。 15.从W1a中取大约1μl 溶液并转移到包含胚泡的液滴旁边，见图2（W1b）。 16.使用玻璃化冷冻用具融合两个液滴，让两者逐渐混合一分钟。 17.从W1a中取少量溶液到移液管中，然后使用它从W1b拾起胚泡并转移到W1a的底部。 18.在W1a中握持胚泡1分钟。胚泡将缩小并浮在液滴的顶部。 19.提示：在下面的步骤中，每次转移胚胎以后，进行下一操作之前，都要排出所有移液管中的液体并从下一滴溶液中吸取一些溶液。在转移过程中要避免产生泡泡。 20.将胚泡从W1a中转移到W2a底部。 21.将胚泡在W2a中握持2分钟。 22.将胚泡从W2a中转移到W2b底部。 23.将胚泡在W2b中握持2分钟。 24.提示：胚泡在W2a和W2b中仍然保持缩小的状态。 25.在W2b的握持时间内，转移三个20μl的解冻液3到embryo GPS® 操作皿中，见图2（W3a, W3b & W3c）。 26.将胚泡从W2b中转移到W3a底部。 27.将胚泡在W3a中握持3分钟。 28.将胚泡从W3a中转移到W3b顶部。 29.将胚泡在W3b中握持3分钟。 30.将胚泡从W3b中转移到W3c顶部。 31.将胚泡在W3c中握持3分钟。 32.最后，将胚泡转移到一个已经装有预先平衡过的合适的培养基的embryo GPS® 操作皿中，并且在CO2培养箱37°C培养3~4小时，以便在胚胎移植前做进一步的操作。 如果需要解冻更多的胚泡，重复上述8~22步骤，需要使用新的GPS® 胚胎操作皿以及新鲜的平衡液和玻璃化冷冻液。 global® DMSO 胚泡复温套装溶液用于已玻璃化冷冻的人胚泡的解冻操作步骤图示，请查看说明。 图6 插图说明 W1a = 解冻液1 – Drop a W1b =解冻液1 – Drop b W2a = 解冻液2 – Drop a W2b =解冻液2 – Drop b W3a = 解冻液3 – Drop a W3b = 解冻液3 – Drop b W3c =解冻液3 – Drop c B = 液滴底部 T = 液滴顶部 时间指示是指胚泡在每液滴中的时间 产品名称 global® DMSO 胚泡玻璃化复温套装 订购号DMVR-003 产品名称global® DMSO 胚泡玻璃化复温套装（基于S3） 订购号GBTH-005